高速反流色譜法(HSCCC)是一項強有力的分離技術，并逐漸應用于天然產物化學。分析型HSCCC的儀器已經可以得到，并有在天然產物化學方面應用的綜述。若干種類型的檢測器已經被連接到分析型HSCCC儀器上，其中包括UV、IR和質譜(MS)等檢測器。這些系統(tǒng)能提供關于溶質結構的重要信息。然而它們對于HSCCC的應用受限于儀器使用的復雜性(MS)，高噪音水平(UV)或靈敏度(IR)。 
光散射作為液相色譜法的一種選擇檢測原理已被提出。蒸發(fā)激光光散射檢測法(ELSD)作為一種通用檢測方法，是基于以下原理：洗脫液［例如來自一個高效液相色譜(HPLC)柱］被霧化和蒸發(fā)，從而在載氣流中留下溶質的微小粒子。這些粒子通過一激光束，使光發(fā)生散射，散射的光被檢測。其響應的大小與通過檢測器的溶質質量有關。已經證實，使用HPLC分析碳水化合物和類脂時，ELSD會特別有用。
1.實驗
溶媒HPLC級(Burdick & Jackson)。水通過Milli-Q系統(tǒng)(Millipore)凈化。參比物從C.Roth Inc.(Karlsruhe,F.R.G.)購買�！拔⒘俊备咚俜戳魃�譜儀與一個30 mL螺旋管和0.85 mm I.D.聚四氟乙烯管從P.C.Inc.(Potomac,MD,U.S.A.)獲得；溶媒利用Milton Roy實驗室的泵泵�。籈LSD系統(tǒng)從Varex(Burtonsville,MD,U.S.A.)獲得；色譜圖被記錄在Varian 9176型圖記錄儀上(滿標1 mV)。
首先用固定相充滿HSCCC螺旋管，然后開始旋轉，這時固定相被持續(xù)泵入。當轉速達到1800 r.min-1時，流動相通過入口被引入。當螺旋管達到平衡以后(即流出物由固定相改為流動相時)，將流速調為0.8 mL.min-1。然后，將螺旋管出口與光散射檢測器相連接。當基線變得平滑時指示溶媒已被完全蒸發(fā)。將化合物1～4(見圖1)溶解在固定相里。樣品溶液通過Valco公司的六通閥和0.25 mL樣品環(huán)注入(圖1，0 min)。注入的量為300 μg(1)，10 μg(2)，35 μg(3)和20 μg(4)。反壓低于1378.95 kPa，運行后固定相保留90%。檢測器預熱20 min；時間恒量為1 s。將檢測器的隨意流動設為8，形成一個反壓為220.6 kPa的氮載氣流。
2.結果和討論
HSCCC完成的標準化合物1～4的混合物的分離，這種分離由溶媒系統(tǒng)氯仿—甲醇—水(13∶7∶8)下層作為流動相完成。流速為0.8 mL.min-1。螺旋管流出物被直接引入ELSD系統(tǒng)的噴霧室內。噴霧室和排氣管的溫度被分別設定為110 ℃和80 ℃。設定相對高的溫度是為了蒸發(fā)流動相中的少量水份，并使非保留固定相(含水的)盡可能微滴化。含水固定相遺留下來不會影響色譜。對于2～4化合物(熔點超過200 ℃)每種化合物每次注射10～35 μg時，可以得到很好的檢測響應。而化合物1即使每次注射大于100 μg，也僅可給出相對微弱的檢測信號。對此可能的解釋為：熔點為117 ℃的7-甲氧基香豆素(1)以液狀微滴通過檢測器光束，由此導致激光光線不能有效地散射。當同一樣品混合物被分離時，其信噪比優(yōu)于光電二極管檢測器。
ELSD是一種靈敏而非專一性的質量檢測方法，其檢測限大于毫微克數(shù)量級。然而，如果物質的熔點等于或小于噴霧室溫度，則可能難以檢測。正如這里應用的例子。這一點對于一個復雜的樣品，象分析植物提取物時則必須考慮。由于ELSD是一個非破壞技術，為了在制備型HSCCC使用這個檢測方法，可以在洗脫線上裝置一個流量分離管。由于固定相的殘留而引起檢測噪音，典型的象UV檢測器，則被完全消除了。我們的初步結果顯示，對分析型HSCCC來說，ELSD是一種理想的、易使用的檢測手段。進一步對于無紫外線吸收化合物和高紫外切斷的溶媒的評價，目前正在我們實驗室進行中。