第一節(jié) 金相顯微鏡
Ugi5OKdj7) eX<K5K.B 前面講述了顯微鏡的光學(xué)原理以及附件,下面將分類介紹一下各類研究用鏡檢術(shù)。在材料研究領(lǐng)域,反射式明場(chǎng)顯微鏡得到廣泛應(yīng)用,在此基礎(chǔ)上各種特殊的鏡檢方法也得到應(yīng)用,如暗場(chǎng),偏光,相襯,干涉,熒光,這些鏡檢方法在高檔顯微鏡上均能同時(shí)實(shí)現(xiàn)。
Bt>}LLBS2 一. 明視野觀察(Bright field)
I^fPk 6tOi^+qN 明視野鏡檢是大家比較熟悉的一種鏡檢方式,廣泛應(yīng)用于病理、檢驗(yàn),用于觀察被染色的切 片,所有顯微鏡均能完成此功能。在此不再贅述。
Mr6E/7g% s!h5hwBY 二. 暗視野觀察(Dark field)
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8syjKTg 3kLOoL? 暗視野實(shí)際是暗場(chǎng)照明。它的特點(diǎn)和明視野不同,不直接觀察到照明的光線,而觀察到的是被檢物體反射或衍射的光線。因此,視場(chǎng)成為黑暗的背景,而被檢物體則 呈現(xiàn)明亮的像。暗視野的原理是根據(jù)光學(xué)上的丁道爾現(xiàn)像,微塵在強(qiáng)光直射通過(guò)的情況下,人眼不能觀察,這是因?yàn)閺?qiáng)光繞射造成的。若把光線斜射它,由于光的反 射,微粒似乎增大了體積,為人眼可見(jiàn)。暗視野觀察所需要的特殊附件是暗視野聚光鏡。它的特點(diǎn)是不讓光束由下至上的通過(guò)被檢物體,而是將光線改變途徑,使其 斜射向被檢物體,使照明光線不直接進(jìn)入物鏡,利用被檢物體表面反射或衍射的光形成明亮圖像。暗視野觀察的分辨率遠(yuǎn)高于明視野觀察,最高達(dá)0.02— 0.004mm。
R}J-nJlb @;9()ad 三.相襯鏡檢法(Phase contrast)
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X/tt 在光學(xué)顯微鏡的發(fā)展過(guò)程中,相襯鏡檢術(shù)的發(fā)明成功,是近代顯微鏡技術(shù)中的重要成就。我們知道,人眼只能區(qū)分光波的波長(zhǎng)(顏色)和振幅(亮度),對(duì)于無(wú)色通明的生物標(biāo)本,當(dāng)光線通過(guò)時(shí),波長(zhǎng)和振幅變化不大,在明場(chǎng)觀察時(shí)很難觀察到標(biāo)本。
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b$ 相襯顯微鏡利用被檢物體的光程之差進(jìn)行鏡檢,也就是有效地利用光的干涉現(xiàn)像,將人眼不可分辨的相位差變?yōu)榭煞直娴恼穹,即使是無(wú)色透明的物質(zhì)也可成為清晰可見(jiàn)。這大大便利了活體細(xì)胞的觀察,因此相襯鏡檢法廣泛應(yīng)用于倒置顯微鏡。
6H;kJHn +)-d_K.(k 1. 相襯鏡檢法在裝置上與明場(chǎng)不同,有一些特殊要求:
a!.!2a&t vug-n 8 ( 1 ). 環(huán)狀光闌(Ring slit): 裝在聚光鏡的下方,而與聚光鏡組合為一體——相襯聚光鏡。它是由大小不同的環(huán)形光闌裝在一圓盤內(nèi),外面標(biāo)有10X、20X、40X、100X等字樣,與相對(duì)應(yīng)倍數(shù)的物鏡配合使用。
Q=.g1$LP /v&`!nKu ( 2 ). 相板(Phase plate): 裝在物鏡的后焦平面處,它分為兩部分,一是通過(guò)直射光的部分,為半透明的環(huán)狀,叫共軛面;另一是通過(guò)衍射光的部分,叫“補(bǔ)償面”。有相板的物鏡稱“相襯物鏡”,外殼上常有“Ph”字樣。
$DV-Ieb =mJF_Ri 2. 相襯鏡檢法是一種比較復(fù)雜的鏡檢方法,想要得到好的觀察效果,顯微鏡的調(diào)試非常重要。除此之外還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面。
ct\<;I(H DN|vz}s ( 1 ). 光源要強(qiáng),全部開(kāi)啟孔徑光闌;
SY6r 8RK @+0V& jc ( 2 ). 使用濾色片,使光波近于單色;
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四.微分干涉相襯鏡檢術(shù)(Differential interference contrast DIC)
9`&77+|;e zMU68vwM 微分干涉相襯鏡檢術(shù)出現(xiàn)于60年代,它不僅能觀察無(wú)色透明的物體,而且圖像呈現(xiàn)出浮雕壯的立體感,并具有相襯鏡檢術(shù)所不能達(dá)到的某些優(yōu)點(diǎn),觀察效果更為逼真。
Ak|b0l>^ ew"m!F# 1. 原理
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