摘要：雙光子成像（Two-Photon Imaging）技術(shù)以其優(yōu)越特性被廣泛用于活細(xì)胞動(dòng)態(tài)三維成像，但光功率極高的短脈沖光對(duì)焦平面熒光分子嚴(yán)重的光漂白極大地影響了雙光子長(zhǎng)時(shí)間成像的圖像質(zhì)量，針對(duì)雙光子熒光漂白問(wèn)題，本文提出一種優(yōu)化光照的雙光子（Optimized Lighting-Two Photon，OL-TP）成像技術(shù)。通過(guò)預(yù)掃描獲取雙光子圖像分析高低閾值，以預(yù)設(shè)的高低閾值為標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化一幅圖像中不同區(qū)域的光照時(shí)長(zhǎng)，利用掃描過(guò)程中記錄的熒光信息和光照時(shí)間信息可以重建OL-TP圖像，既保證信噪比又降低熒光漂白。重建的OL-TP圖像與傳統(tǒng)雙光子圖像基本一致，信噪比略有降低，但圖像并未失真。對(duì)110 nm的熒光小球樣本分別連續(xù)取30幅普通雙光子和優(yōu)化光照的雙光子圖像，到第30幅圖時(shí)，重建后的優(yōu)化光照雙光子圖像比普通雙光子圖像熒光漂白降低了28.86%。OL-TP通過(guò)優(yōu)化光照時(shí)間大幅降低雙光子成像的熒光漂白，使雙光子熒光顯微鏡能夠更好地對(duì)生物樣本進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間觀測(cè)。 'R99m ?"
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關(guān)鍵詞 ： 雙光子顯微成像, 熒光顯微成像, 熒光漂白
