樣品要求:
J G$Z.s 1.經(jīng)熒光探劑標(biāo)記(單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo))
vXE0%QE'Q 2.固定的或活的組織
!t#F/C 3.固定的或活的貼壁培養(yǎng)細(xì)胞(Confocal專用小培養(yǎng)皿,蓋玻片)
Fhf<T` 4.懸浮細(xì)胞,甩片或滴片后,用蓋玻片封
aZS7sV28 一. 組成
g>JLDQdc 倒置或直立熒光顯微鏡、掃描頭(照明針孔、探測針孔、熒光濾片系統(tǒng)、鏡掃描系統(tǒng)和光電倍增管)、掃描頭控制電路、計算機和圖像輸出設(shè)備
78 f$6J q 二. 原理
-NJ!g/ >mM Confocal
(s<s@` 利用放置在光源后的照明針孔和放置在檢測器前的探測針孔實現(xiàn)點照明和點探測,來自光源的光通過照明針孔發(fā)射出的光聚焦在樣品焦平面的某個點上,該點所發(fā)射的熒光成像在探測針孔上,該點以外的任何發(fā)射光均被探測針孔阻擋。照明針孔與探測針孔對被照射點或被探測點來說是共軛的,因此被探測點即共焦點,被探測點所在的平面即共焦平面。計算機以像點的方式將被探測點顯示在計算機屏幕上,為了產(chǎn)生一幅完整的圖像,由光路中的掃描系統(tǒng)在樣品焦平面上掃描,從而產(chǎn)生一幅完整的共焦圖像。只要載物臺沿著Z軸上下移動,將樣品新的一個層面移動到共焦平面上,樣品的新層面又成像在顯示器上,隨著Z軸的不斷移動,就可得到樣品不同層面連續(xù)的光切圖像。
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