近日，中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所微型分析儀器研究組研究員關(guān)亞風(fēng)和副研究員耿旭輝團(tuán)隊(duì)與大連理工大學(xué)物理學(xué)院教授王曉娜團(tuán)隊(duì)合作，在低成本高靈敏度激光誘導(dǎo)熒光檢測器（LIF）研制及其在單細(xì)胞低豐度蛋白定量分析方面取得新進(jìn)展。 -Kxc$}  
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　　定量檢測單細(xì)胞表面和內(nèi)部的低豐度蛋白，是在分子水平上研究生命過程的重要支撐技術(shù)。但商品化高靈敏LIF儀器價(jià)格昂貴，推廣應(yīng)用受限。該團(tuán)隊(duì)在前期工作中，采用小型、廉價(jià)的激光二極管替代激光器為光源，用自主研制的硅基弱光探測器替代進(jìn)口光電倍增管（PMT）探測熒光，研制出“緊湊式”共聚焦LIF，對熒光素檢測限達(dá)到3×10^-12 M（50 μm檢測池），且功耗和開機(jī)平衡時(shí)間優(yōu)于進(jìn)口儀器（Talanta, 2018, 182, 279）。在此基礎(chǔ)上，該團(tuán)隊(duì)選用具有高亮度、長斯托克位移的BV605熒光標(biāo)記的抗體，進(jìn)行免疫熒光標(biāo)記，用毛細(xì)管電泳（CE）和LIF定量分析了單個(gè)白血病細(xì)胞中的active caspase3蛋白，檢測限達(dá)7個(gè)分子（91 pL檢測體積內(nèi)）。研究發(fā)現(xiàn)，98個(gè)單細(xì)胞內(nèi)的active caspase3蛋白分子數(shù)范圍在629至12171個(gè)/細(xì)胞，顯示出極大的差異性。這是國際上首次報(bào)道在單細(xì)胞層次上定量檢測active caspase3蛋白（Analytical Chemistry, 2019, 91, 11493）。 .+.j*>q>u  
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　　近期，該團(tuán)隊(duì)創(chuàng)新性地提出在LIF中設(shè)計(jì)使用球面二向色反光鏡，將檢測池放置在球心而不是常規(guī)的反光鏡的焦點(diǎn)上，同時(shí)使用40倍長焦距物鏡、527-70 nm寬帶發(fā)射濾光片與450-30 nm激發(fā)濾光片組合，將信噪比提高25倍。用流動注射方法（50 μm檢測池）評價(jià)，該LIF對熒光素鈉的檢測下限（3σ方法）低至1.5×10^-13 M或8.9個(gè)熒光素鈉分子（在98 pL檢測體積內(nèi)），是文獻(xiàn)報(bào)道的用流動注射方法評價(jià)LIF儀器的最高靈敏度。將該LIF與CE聯(lián)用，分析檢測三種氨基酸，檢測限從亞pM至fM級，比使用常規(guī)內(nèi)徑毛細(xì)管的檢測限低上百倍，顯示出該檢測器在超痕量生物、環(huán)境樣品分析及單細(xì)胞內(nèi)低拷貝數(shù)分子檢測應(yīng)用中的潛力。 };katqzEg  
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　　研究成果發(fā)表在《分析化學(xué)》（Analytical Chemistry）上。以上工作得到國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目、中國科協(xié)青年人才托舉工程項(xiàng)目、大連化物所科研創(chuàng)新基金項(xiàng)目的資助。 8Y{s;U0n  
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　　相關(guān)鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.0c01180 PCE4W^ns  
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