[原創(chuàng)]流式細(xì)胞儀(思路較完整版) [復(fù)制鏈接]

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只看該作者 10樓發(fā)表于: 2016-11-21

工作太忙,不知道更得了更不了了....
上面的所有東西形成三個可能性約束:
1.光譜測試分辨率不需要很高,而是需要準(zhǔn)確地判定染料的非窄帶光譜及其強(qiáng)度...
2.全測試區(qū)域確實(shí)為200X200UM,可重點(diǎn)測試區(qū)域是200X100或200X150UM.
3.測量靈敏度要高,但高到什么程度是未知的,需要實(shí)驗(yàn)測試...

這些都是圖片里提到的,而且按照圖片的推理,貌似一切都是可以成功的....但這個只是為了一個題目而已,實(shí)際這個項(xiàng)目按這么做早就掛了...

離線niejl

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只看該作者 11樓發(fā)表于: 2016-11-21

由上面的3個條件之前的因素不只這里提到的這些
需要追加:
7.Z軸位置不只不固定,被采集過程還有可能是一半在區(qū)域內(nèi)一半在區(qū)域外的
8.被照明目標(biāo)存在側(cè)向散射,而其側(cè)向散射是可能影響相臨細(xì)胞的
9.其實(shí)細(xì)胞的發(fā)光不是4PI空間的均勻分布.

他們確實(shí)會得到原來的3個技術(shù)要點(diǎn)但卻有所不同
1.分辨率一致;
2.區(qū)域是否200UM,首先要根據(jù)熒光顯微鏡觀察: A運(yùn)動細(xì)胞統(tǒng)計間距,B運(yùn)行速度,C排列方向(重點(diǎn)是同細(xì)胞每次開啟關(guān)閉流動之后排列方式變化)
區(qū)域內(nèi)無差別采集一致
3.效率及靈敏度不是可用,是必須可用靈敏度的至少2倍以上(前提是假設(shè)細(xì)胞統(tǒng)計最小中心距>2倍細(xì)胞大小,如果2的顯微鏡觀測并非如此,靈敏倍率還要變化)..(原因是為了采集到準(zhǔn)確數(shù)據(jù),每個細(xì)胞等效時間需要拍照2次,從而去除非全細(xì)胞的失誤數(shù)據(jù))
而3的方式不是絕對的,還有一種采集方式是累積暴光最后分析,這種需要的靈敏度偏低,可以多次疊加暴光收集統(tǒng)計數(shù)據(jù)...
當(dāng)然無論采用哪種,樣品階段都要以兼容為目的,連拍單細(xì)胞采集和累積暴光都可以做測試才行(已有機(jī)器抄襲例外,這里只討論沒有人做過此產(chǎn)品的情況下該如何進(jìn)行)

離線niejl

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只看該作者 12樓發(fā)表于: 2016-11-21

這些要點(diǎn)得到的和PPT實(shí)際也不同:
要點(diǎn)共同用得到的是:

1.可采用狹縫光譜儀及非運(yùn)動細(xì)胞配合測試靈敏度,如果暴光速度很快,樣品可以使用現(xiàn)有光譜儀
如果暴光速度過慢,要依據(jù)此次暴光得到的數(shù)據(jù)重新設(shè)計光譜儀

2.激發(fā)光要非常均勻,可以高頻地開關(guān),照明區(qū)域受限在采集區(qū)域內(nèi)不止要集中大部分能量,而且邊界要盡力截止防止區(qū)域外細(xì)胞被激發(fā)的影響(雖然熒光不會立刻消失,起碼要防止來方向細(xì)胞的因素,因?yàn)檫@個有不確定性,去方向細(xì)胞的熒光干擾可以記錄軟件大概率排除)

3.激發(fā)光區(qū)域和采集區(qū)域的原則是,1/2細(xì)胞統(tǒng)計間距平均值或均方根的整數(shù)倍,根據(jù)靈敏度測試及使用要求確定整數(shù)的上下限.

4.區(qū)域內(nèi)任何空間點(diǎn)的激發(fā)采集都要是一致的,或根據(jù)要求差異不大于?%\

5.目標(biāo)采集角度根據(jù)兩個條件確定,A是靈敏度,B是觀測細(xì)胞方向,這個比較復(fù)雜如果觀測多細(xì)胞方向全部隨機(jī)那么B忽略, 如果觀測多細(xì)胞方向全部相似B忽略, 如果觀測多細(xì)胞方向較為一致但每次關(guān)閉開啟后由于聚焦條件變化多次開關(guān)整體不同就要測試熒光發(fā)光角度(接下來的討論假設(shè)這種低概率情況不存在,假設(shè)顯微鏡觀察到的所有細(xì)胞都是隨即方向的)
這條按照細(xì)胞方向隨機(jī)以靈敏度判定采集角度, 并假設(shè)已采購光譜儀測試靈敏度完成得到結(jié)論全30度水中張角的采集加上重新設(shè)計的光譜儀能達(dá)到之上2倍可用靈敏度.

離線niejl

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只看該作者 13樓發(fā)表于: 2016-11-21

繼續(xù)干活,過段時間再更吧..............

離線measure123

高級工程師

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只看該作者 14樓發(fā)表于: 2016-11-30

感覺用熒光顯微鏡來測難度有點(diǎn)欠準(zhǔn)確，遇到的干擾光會較多。流式細(xì)胞儀，光學(xué)是核心檢測子系統(tǒng)，但與你配合的液路和硬件同樣非常關(guān)鍵。光學(xué)系統(tǒng)做的再好，如果相關(guān)子系統(tǒng)扯后腿，最后的效果會比你預(yù)想的差得多。