工作太忙,不知道更得了更不了了.... rz%[o,s  
上面的所有東西形成三個(gè)可能性約束: sgb+@&}9n  
1.光譜測(cè)試分辨率不需要很高,而是需要準(zhǔn)確地判定染料的非窄帶光譜及其強(qiáng)度... 1X!f!0=g+  
2.全測(cè)試區(qū)域確實(shí)為200X200UM,可重點(diǎn)測(cè)試區(qū)域是200X100或200X150UM. v[3hnLN%  
3.測(cè)量靈敏度要高,但高到什么程度是未知的,需要實(shí)驗(yàn)測(cè)試... @e?[oojrM  

圖片:未命名A.JPG

r{6B+3J  
這些都是圖片里提到的,而且按照?qǐng)D片的推理,貌似一切都是可以成功的....但這個(gè)只是為了一個(gè)題目而已,實(shí)際這個(gè)項(xiàng)目按這么做早就掛了...

由上面的3個(gè)條件之前的因素不只這里提到的這些 4uAb LSh9  
需要追加: 8wx#,Xa  
7.Z軸位置不只不固定,被采集過(guò)程還有可能是一半在區(qū)域內(nèi)一半在區(qū)域外的 \g6 #MNW  
8.被照明目標(biāo)存在側(cè)向散射,而其側(cè)向散射是可能影響相臨細(xì)胞的 n)?F 9Wap  
9.其實(shí)細(xì)胞的發(fā)光不是4PI空間的均勻分布. &#b>AAx$2Y  
eiSO7cGy  
他們確實(shí)會(huì)得到原來(lái)的3個(gè)技術(shù)要點(diǎn)但卻有所不同 \#oV<MR  
1.分辨率一致; fdEj#Ux<H  
2.區(qū)域是否200UM,首先要根據(jù)熒光顯微鏡觀察:  A運(yùn)動(dòng)細(xì)胞統(tǒng)計(jì)間距,B運(yùn)行速度,C排列方向(重點(diǎn)是同細(xì)胞每次開(kāi)啟關(guān)閉流動(dòng)之后排列方式變化) qx<zX\qI6n  
    區(qū)域內(nèi)無(wú)差別采集一致 JA(q>>4  
3.效率及靈敏度不是可用,是必須可用靈敏度的至少2倍以上(前提是假設(shè)細(xì)胞統(tǒng)計(jì)最小中心距>2倍細(xì)胞大小,如果2的顯微鏡觀測(cè)并非如此,靈敏倍率還要變化)..(原因是為了采集到準(zhǔn)確數(shù)據(jù),每個(gè)細(xì)胞等效時(shí)間需要拍照2次,從而去除非全細(xì)胞的失誤數(shù)據(jù)) UmI@":|-  
而3的方式不是絕對(duì)的,還有一種采集方式是累積暴光最后分析,這種需要的靈敏度偏低,可以多次疊加暴光收集統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)... yar IR|  
當(dāng)然無(wú)論采用哪種,樣品階段都要以兼容為目的,連拍單細(xì)胞采集和累積暴光都可以做測(cè)試才行(已有機(jī)器抄襲例外,這里只討論沒(méi)有人做過(guò)此產(chǎn)品的情況下該如何進(jìn)行) `kT$Gx4x  
@_(@s*4W  
}m lbN0v  

這些要點(diǎn)得到的和PPT實(shí)際也不同: VrL>0d&d  
要點(diǎn)共同用得到的是: Iur} ZA
z  
WC&Ltw8  
1.可采用狹縫光譜儀及非運(yùn)動(dòng)細(xì)胞配合測(cè)試靈敏度,如果暴光速度很快,樣品可以使用現(xiàn)有光譜儀 c oz}VMp  
   如果暴光速度過(guò)慢,要依據(jù)此次暴光得到的數(shù)據(jù)重新設(shè)計(jì)光譜儀 BPs &  
WD1$"}R
 
2.激發(fā)光要非常均勻,可以高頻地開(kāi)關(guān),照明區(qū)域受限在采集區(qū)域內(nèi)不止要集中大部分能量,而且邊界要盡力截止防止區(qū)域外細(xì)胞被激發(fā)的影響(雖然熒光不會(huì)立刻消失,起碼要防止來(lái)方向細(xì)胞的因素,因?yàn)檫@個(gè)有不確定性,去方向細(xì)胞的熒光干擾可以記錄軟件大概率排除) vPq\reKe  
/9#jv]C:  
3.激發(fā)光區(qū)域和采集區(qū)域的原則是,1/2細(xì)胞統(tǒng)計(jì)間距平均值或均方根的整數(shù)倍,根據(jù)靈敏度測(cè)試及使用要求確定整數(shù)的上下限. _C#()#  
KT?s\w  
4.區(qū)域內(nèi)任何空間點(diǎn)的激發(fā)采集都要是一致的,或根據(jù)要求差異不大于?%\ QlXF:Gx"=  
m1Z8SM+  
5.目標(biāo)采集角度根據(jù)兩個(gè)條件確定,A是靈敏度,B是觀測(cè)細(xì)胞方向,這個(gè)比較復(fù)雜如果觀測(cè)多細(xì)胞方向全部隨機(jī)那么B忽略, 如果觀測(cè)多細(xì)胞方向全部相似B忽略, 如果觀測(cè)多細(xì)胞方向較為一致但每次關(guān)閉開(kāi)啟后由于聚焦條件變化多次開(kāi)關(guān)整體不同就要測(cè)試熒光發(fā)光角度(接下來(lái)的討論假設(shè)這種低概率情況不存在,假設(shè)顯微鏡觀察到的所有細(xì)胞都是隨即方向的) i